抗體夾心法檢測HBsAg過程及方法雙 
臨床輸血中如果輸入含肝炎標(biāo)志物的血液,有40%-76%受血者將患有肝炎危險.以下我們將介紹用青島捷世康生物科技有限公司銷售的ELISA試劑盒以雙抗體夾心法檢測乙型肝炎的操作方法以及常見問題的解決方法.
實驗原理
ELISA雙抗體夾心法的原理是將特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體,然后和待檢徐慶忠的相應(yīng)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物,洗滌后在加酶標(biāo)抗體,與免疫復(fù)合物中的抗原結(jié)合性成酶標(biāo)抗體-抗原-固相抗體復(fù)合物,加底物顯色,判斷抗原含量,一下我們將以HBsAg為例為您展示我公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒的操作.
試劑與器材:
人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒(青島捷世康生物科技有限公司)
溫箱
酶標(biāo)反應(yīng)板
酶標(biāo)分光光度計.
操作方法:
1 包被 取包被液適當(dāng)稀釋的HBsAg-IgG 0.1ml,加到聚苯乙烯反應(yīng)板各孔中,最后一孔不加以作為空白對照.加蓋,4度24小時.次日用洗滌液充分洗滌3次,甩干.
2 隔空內(nèi)加稀釋倍數(shù)的待檢血清0.1ml,同時加陽性和陰性對照血清,置于43度溫箱60min,移去液體.同前法洗滌三次,甩干.
3各孔內(nèi)加入稀釋HRP-抗 HBs-IgG 0.1ml,置于43度溫箱60min,移去液體,洗滌三次,甩干.
4 各孔加底物液0.1ml 置于黑暗處20min
5 各孔加入2mol/L H2SO4 0.05ml,終止反應(yīng).
結(jié)果 
1目測法 陽性孔呈橘黃色,陰性孔無色或及淺黃色.
2 比色法 用酶標(biāo)分光光度計測 計算P/N值.如P/N≥2.1,結(jié)果為陽性,負(fù)責(zé)為陰性.
 
雙抗體夾心法試驗簡便,敏感,特異,但試驗中需要注意以下問題
1 雙抗體夾心法測定中應(yīng)注意RF的干擾.RF是一種自身抗體,具有和多種動物IgG的Fc端結(jié)合的能力.測定時可同時結(jié)合固相抗體和酶標(biāo)抗體,也能催化底物顯色,出現(xiàn)假陽性反應(yīng).反應(yīng)中的抗體試劑若先經(jīng)胃蛋白酶或木瓜蛋白酶處理,去除Fc段可有效改善特異性.
2標(biāo)本應(yīng)無溶血,因紅細(xì)胞溶解會釋放出過氧化物酶活性的底物,再以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,溶血標(biāo)本有可能導(dǎo)致特異顯色:標(biāo)本以新鮮采集為宜,污染細(xì)菌的標(biāo)本坑能產(chǎn)生非特異顯色,印軍體重可能含有內(nèi)源性HRP.
3 保存過程最好采用恒溫水浴箱,用塑料黏紙密封反應(yīng)板孔,讓反應(yīng)板飄浮在水面上,如用溫箱應(yīng)放在濕盒中,不能數(shù)塊ELISA板疊放.
青島捷世康生物科技有限公司主營ELISA試劑盒 進(jìn)口ELISA試劑盒,國產(chǎn)ELISA試劑盒,培養(yǎng)基,標(biāo)準(zhǔn)品,部分中檢所產(chǎn)品有優(yōu)惠.我公司將以放心的質(zhì)量服務(wù)您的檢測試驗.我公司另提供免費(fèi)代測服務(wù).如因標(biāo)本存放及運(yùn)輸要求較高時可提供上門取樣.歡迎來電咨詢訂購.聯(lián)系電話:0532-58720157
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